Домой > Новости > Новости компании

Анализ общих проблем экспрессии прокариотических белков

Время обновления : 2021-03-04

Источник :

Просмотры : 25

Анализ общих проблем экспрессии прокариотических белков

Прокариотическая экспрессия относится к способу конструирования вектора экспрессии и введения чужеродного гена-мишени в штамм экспрессии с помощью технологии клонирования генов, чтобы он мог экспрессироваться в конкретном прокариотическом организме или клетке. Система экспрессии прокариотических белков в настоящее время является наиболее часто используемым и наиболее экономичным методом экспрессии белков. Система экспрессии Escherichia coli является одной из наиболее широко используемых систем экспрессии прокариотических белков.

Escherichia coli expression system Features

Полная система экспрессии обычно включает поддерживающие векторы экспрессии и штаммы экспрессии. Если это специальная индуцированная экспрессия, она также включает индуктор, а экспрессия слияния также включает систему очистки или обнаружение меток. Выбор системы экспрессии обычно зависит от цели эксперимента, такой как уровень экспрессии, активность целевого белка, метод очистки продукта экспрессии и так далее. Следующее представляет общие проблемы в процессе прокариотической экспрессии.

 

В: Почему целевой белок всегда появляется в форме телец включения?

A: При прокариотической экспрессии и очистке целевой белок часто неправильно складывается и агрегируется в тельца включения. После индукции экспрессия целевого белка обычно может достигать более 50% от общего клеточного белка.

Хотя определенная часть белка существует в растворимой форме, до 95% белка присутствует в телец включения. Чтобы получить более растворимый белок, во время эксперимента температуру индукции можно снизить, например, на 16-30 ° C, или можно снизить концентрацию IPTG (0,01-0,1 мМ), а время индукции можно продлить. Также можно использовать специальную среду для культивирования бактерий.



В: Почему сложно экспрессировать трансмембранные белки?

A: Относительно низкий уровень успешной экспрессии трансмембранного белка - распространенная проблема. Основных причин может быть две:

 

1. Трансмембранные белки обычно состоят из молекул сильных гидрофобных аминокислот и гидрофильных молекул, которые связаны скачкообразным образом с образованием простейшей гидрофильной и гидрофобной трансмембранной химической структуры, аналогичной структуре сигнальных пептидов.

Для прокариотических клеток простые органеллы вряд ли могут завершить сложный процесс распознавания и удаления сигнального пептида, заставляя эндоплазматический ретикулум и аппарат Гольджи переупаковывать и секретировать, как эукариотические клетки. Некоторые белки многократно пересекают мембрану. Для прокариотических клеток Клетке практически невозможно выполнить задачу.


2. В случае гидрофобных фрагментов тельца включения легко образуются при экспрессии прокариотических клеток. Гидрофобные пептиды могут ингибировать процесс трансляции и даже сливаться со структурой прокариотической мембраны, вызывая токсичность. В инстинкте биологической самозащиты все органеллы остановят процесс синтеза белка.

 

Если вас интересует эта тема, продолжайте следить за обновленной статьей Generalbiosystems об анализе общих проблем экспрессии прокариотических белков.